PCR analiza: HPV dijagnoza s lančanom reakcijom polimeraze

Humani papiloma virus (HPV) – DNK koji sadrži virus različitih vrsta koji uzrokuju tumore u tijelu, licu, rukama i nogama, na usnoj sluznici, vratu i genitalijama. HPV skupine s visokim karcinogenim rizikom dovode do genitalne epitelne neoplazije i značajno povećavaju rizik od raka vrata maternice, vagine, vulve, genitalija i rektuma.

Prema statistici godine, od raka grlića maternice umire oko 250 000 žena. Displazija i rana faza onkologije ne utječu na vaše zdravlje.

Lančana reakcija polimeraze (PCR) određuje uzbudnik DNA u uzorku. Kombinirana uporaba citološkog probira i PCV analize HPV-a povećava vjerojatnost otkrivanja raka i raka vrata maternice za čak 99%. U bolesnika s karcinomom vrata maternice utvrđen je papiloma virus s visokim stupnjem onkogenosti u 92% slučajeva. Nakon presudne uloge u razvoju ove patologije, rana dijagnoza HPV infekcije došla je do izražaja.

Opće informacije o metodi

Lančana reakcija polimeraze: što je to? PCR je metoda molekularne biologije koja se može koristiti za određivanje minimalnog sadržaja određenog fragmenta DNA u biološkom materijalu s više kopija. Ispada da je to dovoljno za učenje.

Ovu je metodu izumila 1983. američka znanstvenica Carrie Mullis, koja je kasnije dobila i Nobelovu nagradu. PCR se često koristi u različite svrhe:

  • Dijagnoza virusnih i bakterijskih infekcija (uključujući HPV);
  • Kriminologija (usporedba materijala s mjesta zločina s sumnjivim obrascima);
  • Identifikacija očinstva, osobna identifikacija;
  • Istraživanja iz područja genetike, biologije, farmacije, medicine.

Glavne prednosti metode:

  • vrlo informativan;
  • mala količina materijala za istraživanje.

Za PCR se može koristiti bilo koji biološki materijal: krv, urin, sjemenska tekućina, pleuralna tekućina, sluznica.

Za dijagnozu humanog papiloma virusa kod žena, grebanje se vrši po grliću maternice, a kod muškaraca uretri.

Za provođenje analize potreban je poseban instrument – pojačalo. Tamo se stavlja uzorak biomaterijala. Toplina se zatim zagrijava, zatim hladi i dodaje se specifična komponenta povezana s dobro definiranim dijelom virusne DNK (ako postoji u materijalu). Taj je ulomak kopiran.

Tada se ciklus u lancu ponavlja nekoliko puta. Nakon nekoliko sati količina DNK se značajno povećava i dovoljna je za daljnji rad. Ukupno trajanje studije je 1-2 dana.

Kada vam je potrebna ova analiza?

Indikacije za preporuku PCR studije su:

  • Program probira za žene u dobi od 25 godina ili 3 godine nakon seksualne aktivnosti (nacionalno usvojene u SAD-u i Europi) radi utvrđivanja rizične skupine raka vrata maternice;
  • Pregled žena koje su bile pregledane na citološku pretragu prije 3 godine;
  • Neoplazija otkrivena citološkim skriningom;
  • sumnjiva citološka prevlaka;
  • Kontrola šest mjeseci nakon liječenja teške neoplazije;
  • prethodno identificirani pozitivni rezultati PCR za HPV visoko rizičnu onkologiju (optimalno godišnje);
  • Diferencijalna dijagnoza genitalnih neoplazmi (koristi se u žena i muškaraca);
  • u sklopu nadzora žena koje su već imale rak grlića maternice;
  • Dijagnoza HPV infekcije prije trudnoće.

Priprema za anketu

Potrebno je uzeti u obzir preporuke za pripremu istraživanja papiloma virusa kako bi se postigli pouzdani rezultati.

  1. HPV analiza PCR metode provodi se manje od mjesec dana nakon prestanka liječenja antibioticima (kroz usta ili injekcije) i 2 tjedna nakon lokalnog liječenja (mast, vaginalni čepići).
  2. U žena se analiza provodi najranije 5 dana nakon menstruacije, najbolje u prvoj polovici ciklusa.
  3. Nakon kolposkopije i ultrazvuka vaginalnom sondom, analiza je dopuštena nakon dva dana.
  4. Dva dana prije ankete isključeni su tuš i seks.
  5. Higijenski postupci zabranjeni su tijekom dana i ujutro.
  6. Muškarci ne uriniraju 2 sata prije testa jer uzimanje Uree u uzorak rezultira lažno pozitivnim rezultatima.

Biomaterialverfahren

Rezultat analize ovisi o kvaliteti prijema materijala. Ako je sterilnost oslabljena, ako strane materije uđu u biomaterijal ili ako nema dovoljno epitelnih stanica za ispitivanje, pokazatelji su nepouzdani.

Kod žena se cerviks prvo liječi sterilnom fiziološkom otopinom. Struganje se vrši posebnom četkom ili sondom. Sondu umetnite oko 1 cm u cervikalni kanal, a zatim je lagano zakrenite oko 3 sekunde, osim kontakta sa stijenkama vagine. Izvadite sondu iz pripremljene epruvete za 10-15 sekundi.

Postupak za muškarce je analogan. Obrišite glavu otvora penisa i uretre fiziološkom otopinom, umetnite sondu 3-4 cm u mokraćnu cijev, okrenite je, bacite i stavite u srednju cijev. Materijal se može čuvati do dva dana na sobnoj temperaturi.

CME indikator (kontrolni materijal) u obliku analize pokazuje da li je materijal za ispitivanje sakupljen da bi se utvrdilo ima li u uzorku dovoljno epitelnih stanica. Dopuštena minimalna vrijednost za jedinice KVM – 4. Ako je indikator ispod 4, analiza se ne može smatrati pouzdanom i treba je ponoviti.

Vrste tehničara

U PCR testu korištene su četiri vrste otkrivanja papiloma virusa.

metoda kvaliteta

Ovo je identifikacija HPV-VRC (visokog karcinogenog rizika) bez identifikacije vrste patogena. Koristi se kao probir u kombinaciji s drugim metodama ispitivanja. To samo ukazuje na činjenicu zaraze jednom ili više vrsta HPV-a. Postoje analize s različitim genotipovima (od 14 do 21).

  • “Otkriveno” – uzorak sadrži DNK jedne ili više vrsta virusa.
  • “Nije otkriveno” – nedostaje u uzorku HPV DNA.

genotip

Ovom tehnikom možete odrediti vrstu HPV VKR. To je važno za prognozu, jer HPV tipovi 16 i 18 uzrokuju više neoplazije i epitelijskog karcinoma od ostalih, što pogoršava prognozu. Za njihovu identifikaciju potrebna je kolposkopija. Kad se zaraze drugim vrstama, najprije ih citologija otklanja.

Genotipizacija se koristi kada se otpornost virusa mora razlikovati od ponovne infekcije. Ako se godinu dana nakon pozitivne analize otkrije ista godina virusa, to znači da ostaje u tijelu. Ako je identificirana druga vrsta, to znači da se dogodila još jedna infekcija.

Često se dogodi da muž i žena prepoznaju različite genotipove virusa, što može dovesti do sporova i sumnji u nevjeru. Međutim, ovo je stanje povezano s različitim razinama oslobađanja tijela od virusa.

  • Odgovor na bilo koju vrstu virusa je “otkriven” ili “neotkriven”.

Kombinirane tehnike

Kvalitativno određivanje HPV VKR genotipiziranjem tipa 16.

  • “Ne prepoznat” – nedostaje DNK ovih vrsta virusa;
  • “Otkriveno, uključujući HPV Tip 16” – Tip 16 + jedan ili više drugih dostupnih;
  • “Otkriveni HPV tipa 16” – od svih ovih virusa, samo tip 16;

Kvantitativno određivanje bez genotipizacije

Ovo određuje broj virusa raka u ispitivanom materijalu. Koristi se za određivanje težine infekcije, prognozu, izbor optimalnog režima liječenja i procjenu ishoda. Postoje kvantitativne analize samo 16 i 18 tipova HPV-a.

Procjena rezultata (HPV na 100.000 stanica):

  • manja od 3 – beznačajna koncentracija virusa;
  • 3-5 – klinički relevantan sadržaj patogena, potencijalna neoplazija ili rizik od njihovog razvoja;
  • više od 5 – povećani sadržaj virusa, velika vjerojatnost epitelijske neoplazije i raka vrata maternice.

ispitivanje trudnoće

Pregled prisutnosti HPV-a treba napraviti prije trudnoće, jer latentni tijek infekcije kasnije može postati klinički uslijed hormonalnih promjena. Mogućnosti liječenja tijekom trudnoće strogo su ograničene.

Postoji rizik od infekcije tijekom porođaja. 6 i 11 vrsta HPV-a mogu dovesti do razvoja papiloma virusa u novorođenčadi.

Stoga vam rana PCR analiza štedi puno problema. Ako se otkrije infekcija, treba je unaprijed liječiti: uklanjanje bradavice i antivirusno liječenje.

Gdje pregledati

PCR je složena analiza i zahtijeva skupu opremu, reagense i obučeno osoblje. Stoga se može provesti samo u specijaliziranim komercijalnim laboratorijima (INVITRO, HELIX) gdje su potrebni uvjeti za primjenu. Troškovi različitih PCR modifikacija kreću se od 900 do 2,5 tisuća rubalja.

Pored toga, 300-400 rubalja potrebno je za prikupljanje biomaterijala za analizu. Neki, koji žele uštedjeti novac, donose srednju cijev u komercijalni laboratorij i materijale za istraživanje u rodilište. U ovom slučaju laboratorija nije odgovorna za nepouzdan rezultat zbog moguće povrede postupka otkaza.

Taktike upravljanja, ovisno o rezultatima ankete

U 90% slučajeva tijelo se bori s virusom jednu i pol do dvije godine (prirodno izlučivanje), s porastom dobi sposobnost samočišćenja se smanjuje. 15% ljudi s pozitivnom PCR analizom razvije neoplaziju grlića maternice u roku od 2 godine.

  1. PCR je negativan, citologija je negativna – nije potrebna posebna kontrola. Preporučuju se godišnje posjete ginekologu i citološki bris.
  2. PCR je pozitivan, rezultat citologije je normalan – posjetite liječnika za pola godine, ponovite citologiju i analizu HPV-a.
  3. PCR je negativan prema rezultatima citologije – prvi simptomi epitelne displazije – promatranje, ponovljena citologija nakon šest mjeseci.
  4. Pozitivan PCR u kombinaciji s atipičnim ćelijama u oblozi je kolposkopija.

PCR je vrlo točna i osjetljiva metoda. Rezultati pogrešne analize gotovo su uvijek povezani s ulaznim smetnjama.

Pregled WRC-a presudan je za cjelokupnu dijagnozu infekcije papiloma virusom kod ljudi, otkrivanje displazije u ranom stadiju i raka vrata maternice, te identifikaciju visoko rizičnih skupina u onkologiji.

HPV PCR analiza – što je to i kako se radi?

Opće informacije

Analiza se temelji na ispitivanju pacijentove DNK kako bi se utvrdila prisutnost stranih elemenata u njemu. Svaka DNA nastaje na temelju četiri nukleotida koji se nalaze u određenom slijedu. Kako virus ulazi u tijelo, redoslijed u tom lancu se mijenja, omogućujući vam brzo praćenje aktivnosti čak i malih stranih čestica. PCR dijagnostička metoda provodi se pomoću virusnih čestica koje uzrokuju brzu diobu stanica.

Takva dijagnoza može nadzirati aktivnost HPV-a ne samo tijekom pojave latentne faze, već i tijekom razdoblja inkubacije kada papiloma virus nije imao vremena prijaviti. PCR kaže:

  • prisutnost HPV-a;
  • Sojevi s kojima je pacijent zaražen;
  • količina virusa u tijelu.

Većina ljudi je zaražena papiloma virusom, ali jak imunitet inhibira manifestaciju i ne dopušta reprodukciju. Iz tog razloga dokaz metode HPV kvalitete nije uvijek opravdan. Nije racionalno je li virus prisutan u tijelu, ali je njegov utjecaj minimalan i ne šteti osobi. Međutim, kvalitativna analiza pokazat će pozitivan rezultat, što može dovesti do zbunjenosti kod pacijenata.

Stoga je najčešća dijagnoza kvantitativna metoda koja vam omogućuje praćenje količine virusa u vašem tijelu i otkrivanje koliko je opasno njegovo djelovanje. Osim toga, važno je odrediti HPV soj. Razvrstavaju se prema stupnju onkogenosti: neki su potpuno sigurni i mogu uzrokovati samo kozmetičke probleme, drugi mogu izazvati rak.

Svaka situacija zahtijeva individualni pristup. Stoga je preporučljivo konzultirati svog liječnika prije provođenja analize. On će vam reći koje su metode i sojevi najbolje testirani na stanje pacijenta.

Indikacija za analizu

HPV infekcija moguća je samo u izravnom kontaktu sa zaraženom osobom. Virus ulazi u krvotok i počinje se razmnožavati u gornjim slojevima kože, uzrokujući da razvije svoje tipične simptome – pojavu papiloma i bradavica. HPV se distribuira na sljedeće načine:

  • u nezaštićenom seksu;
  • pri rođenju djeteta od zaražene majke;
  • Kontakt sa stanom putem običnih predmeta, osobnih stvari, odjeće itd .;
  • u uskom kontaktu s kožom pacijenta.

Većina ljudi s vizualnim simptomima bolesti dijagnosticira se HPV. Međutim, ako se ne pojave, nije zajamčena odsutnost virusa. Također može biti prisutan u krvi i razvijati se asimptomatski. To se posebno odnosi na vrste visoko onkogenih virusa: rak soja 16 i 18. Dijagnoza ove vrste obično se postavlja kod preporuka za specijalizirane stručnjake: ginekologe i urologe.

Prednosti metode

PCR se smatra jednom od najvažnijih metoda dijagnostike i još uvijek je najpopularniji među liječnicima. Koristi se ne samo za otkrivanje HPV-a, već i za otkrivanje drugih spolno prenosivih bolesti, hepatitisa, prikrivenih infekcija itd. PCR dijagnostika nudi nekoliko prednosti u odnosu na druge metode otkrivanja bolesti. To uključuje:

  1. Visoka specifičnost. Test će najvjerojatnije pomoći u odvajanju tragova stranih DNK od ljudske DNK u prikupljenom materijalu.
  2. Visokog kapaciteta. PCR je automatizirani proces koji vam pomaže dijagnosticirati na dan ispitivanja. Ovo stanje istraživanja omogućava pacijentu da nakon dugog vremena skrbi o rezultatu i dobije rezultat u roku od nekoliko dana.
  3. Sposobnost pokretanja više testova istovremeno. Uzorak se može koristiti za dijagnosticiranje više bolesti. Na primjer, možete istovremeno identificirati klamidiju i gonoreju. Međutim, takav postupak ne utječe na pouzdanost rezultata.
  4. Visoka osjetljivost. Test također može otkriti aktivnost virusa u vrijeme inkubacije, kada je njegova koncentracija vrlo niska. To će pomoći spriječiti razvoj patološkog procesa i započeti rano liječenje.

Slabost metode

Međutim, postoje neke negativne točke u PCR dijagnostici. Glavna stvar je mogućnost lažno pozitivnog rezultata. To se događa kada je liječenje već završeno, infekcija je prevladana, ali mrtve stanice još uvijek ostaju u tkivu. Osvježavanje ćelija traje neko vrijeme.

Ako analiza traje duže od 2 do 3 mjeseca, PCR može pokazati pozitivan rezultat, jer se mrtve stanice već smatraju živim stanicama. Metoda između njih ne razdvaja se, ima za cilj otkriti DNK virusa koji se nalazi i u već mrtvim stanicama. Sve to dovodi do lažno pozitivnog rezultata. Ova situacija se može izbjeći ako test izvršite u roku koji je odredio vaš liječnik.

Postoji i opasnost od lažno negativnog rezultata. U tom slučaju pacijent ne može ni na koji način utjecati na kvalitetu dijagnoze jer je pogrešna negativna analiza laboratorijska greška. To se može dogoditi ako:

  • sakupljeni materijal bio je pogrešno transportiran i skladišten;
  • Sterilnost je narušena i drugi mikroorganizmi upadaju u mikro uzorke.
  • Reagenti su bili neupotrebljivi.

Da bi se isključila mogućnost lažnih negativnih rezultata, treba odabrati certificiranu laboratoriju s kvalificiranim osobljem.

Vrste tehničara

Za PCR dijagnostiku razvijene su četiri dijagnostičke metode. Svaka ima svoje karakteristike ponašanja i dobila je ime po stanju pacijenta. Ako želite odabrati najbolji način, trebali biste se posavjetovati s liječnikom.

metoda kvaliteta

Ova metoda koristi se za potvrđivanje ili odbijanje prisutnosti virusa u tijelu. Njegov glavni nedostatak je nemogućnost određivanja HPV soja (samo 14-21 vrsta). Metoda kvalitete najčešće se koristi zajedno s drugim metodama otkrivanja virusnog papiloma. Ocjena se prenosi s dvije ocjene: “prepoznato” ili “nepriznato”. To znači da se metoda odnosi na DNK druge osobe ili ukazuje na njihovu odsutnost.

genotip

Ova je tehnika sposobna otkriti prisutnost virusa u tijelu i odrediti njegovu vrstu. Ovom se metodom utvrđuje je li virusna DNA još uvijek prisutna nakon liječenja ili je došlo do nove infekcije. Pomoću genotipizacije možete procijeniti učinkovitost liječenja određivanjem vrste virusa. Liječenje je bilo neuspješno za isti soj od kojeg je bio liječen. Ako studija pokazuje drugu vrstu HPV-a, možda govorite o ponavljajućoj infekciji. Rezultat je formulacija “pronađena” ili “neidentificirana”.

Kombinirana metoda

Visoko specijalizirana dijagnostička metoda koja se temelji na kombinaciji kvalitativnih metoda i određivanju 16 sojeva genotipizacijom. Rezultat su 3 odgovora: “nije otkriveno”, “otkriveno 16 sojeva”, “16 dokazanih vrsta HPV-a”. Ova metoda koristi se za sažimanje visokog rizika papiloma virusa koji može izazvati rak grlića maternice kod žena.

Kvantitativna metoda

Ovom metodom možete prilagoditi koncentraciju virusa u tijelu i pratiti razvoj HPV-a. Smatra se najinformativnijim jer omogućuje utvrđivanje težine postupka odabira. Određivanjem broja virusnih stanica na 100.000 pregledanih. Ako kombinacija prelazi 5, to ukazuje na visoku koncentraciju virusnih papiloma, što povećava vjerojatnost nastanka stanica raka. Ako je broj stanica manji od 3, koncentracija je naznačena kao zanemariva.

Kako mogu napraviti analizu?

Nije potrebna posebna dijagnostička obuka. Glavni uvjet je da ne urinirate satima prije operacije. Preporučuje se da nemate spolni odnos i ne pijete alkohol 2-3 dana prije pregleda. Istodobno, ne bismo trebali zaboraviti uvesti postupke za održavanje intimne higijene.

Kako analizirati muškarce

Genitalna glava se liječi fizički zajedno s uretrom. rješenje. Liječnik koristi posebnu četku, koja se umetne oko 4 cm. Materijal koji se pregledava uklanja se okretanjem svjetla iz uretre. Rezultirajuća analiza pohranjuje se u epruvetu i šalje u laboratorij na daljnje istraživanje. Biomaterijal se može pohraniti od prijema do 2 dana.

Kako napraviti analizu žena

Prije ispitivanja, sterilna otopina se nanosi na cerviks. Zatim uklonite bris s četkom iz grlića maternice. Uređaj je dubok oko centimetar, a zatim doktor ogrebe zidove okretanjem pokreta. Biomaterijal se nalazi u epruveti koja traje oko 15 sekundi. Tamo ga doktor obriše po zidovima, a zatim ga ukloni. Sadržaj epruvete zatim se šalje na dijagnozu.

Uzorkovanje biomaterijala

Pravilno prikupljanje materijala ključ je uspješne dijagnoze. Ako se tijekom ovog procesa poremeti sterilnost i strani mikroorganizmi uđu u cijev, može se otkriti “virus” koji zapravo ne postoji. Pored toga, može doći do pogreške zbog malog broja uklonjenih stanica za analizu.

Objašnjenje PCR analize

Ovisno o dijagnostičkoj metodi, pacijent vidi različite rezultate kontrole. Stupac “neprepoznat” znači da virusa nema u tijelu ili je količina toliko mala da ga nije moguće otkriti. Rezultat “otvoren” ukazuje na prisutnost patološkog procesa.

Ako pacijent koristi kvantitativnu metodu, dekodiranje je sljedeće:

  • Lg 5 i više – visoke koncentracije virusa;
  • Lg 3-5 – Razina virusa je važna, ali nije kritična.
  • Lg manje od 3 – mali broj virusnih stanica.

U svakom slučaju, liječnik se mora baviti točnim dekodiranjem, jer će to dati dijagnozu. Pored toga, prikladno je ponoviti postupak nakon određenog vremena kako bi se izbjegli lažni negativni ili lažno pozitivni rezultati.

Leave a Reply